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淺析光遺傳學技術在三箱社交行為實驗中的測試方法與注意事項
點擊次數:98 發布時間:2021-03-22

1、 動物三箱社交自由探索實驗(three chamber free exploring test)

小鼠天性對新奇事物有好奇心,研究表明,與熟悉的環境相比,小鼠對不 熟悉的環境有更強探索yu望。本實驗是在一個(20+8+20) *20cm的位置偏好箱 中完成的,包含左側箱、右側箱和中間箱(自由運動時小鼠從中間箱放入,避 免人為控製的左右箱進入順序對實驗結果造成影響)。自由探索實驗(free exploring)以及後麵將要提到的實時位置偏好實驗均是用這種三箱裝置完成, 每套三箱設備使用不同的花紋的壁紙以及不同紋路地板作為不同環境。所用到 的壁紙有四種圖案,A.黑白星形格B.斜黑白條紋C.黑白方格D.豎直黑白 條紋,本文所用到的地板有兩張,地板1.左側平板,右側淺斜條紋;地板2. 側空心圓格,右側空心條紋,將環境與地板配對使用。

環境自由探索實驗旨在評價小鼠的探索行為,研究目標腦區及環路在探索 行為中所起的作用。自由探索實驗中,所用到環境為A.黑白星形格+B.斜黑白 條紋壁紙和地板1左側平板,右側淺斜條紋,每次實驗前均需測試小鼠對三箱 環境偏好的基礎值,即baseline測定。

2、主要材料和設備

材料和設備廠商信息

 

行為測試箱

 
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3、三箱社交探索實驗基本步驟

本文采用的自由探索行為實驗(free exploring)包括連續三天的測試。

  • 第YI天為基線baseline檢測,每隻小鼠放入中央箱之後開始自由探索,每 隻小鼠探索時間為20min,軟件將自動記錄小鼠運動軌跡、平均速度以及在各 箱所停留的時間進入次數等參數,將其記為baselineo

  • 第二天為training階段,用中間隔板將小鼠限製於某一側環境,讓其在zhi定的20*20cm單側箱內自由探索,並同時給予473nm LED光照,刺激參數 BLA/NAC均為20Hz, 15ms,光纖末端光強10mw左右。(為避免激光損輸出 傷,刺激模式為3s-on-3s-off不斷循環,直到20min測試時間束。)

  • 第三天為test階段,位置偏好箱兩側均正常開放,將小鼠置於中央箱,令 其自由探索20min,並利用軟件係統自動記錄小鼠運動軌跡、平均速度以及在 各箱所停留的時間、進入次數等參數,將其記為Test

(環境探索實驗使用的三箱環境為A.黑白星形格+ B.斜黑白條紋壁紙和地 板1左側平板,右側淺斜條紋。由於第二天training階段在zhi定封閉環境中給 光刺激20min,在第三天test時,與非刺激環境相比,該光刺激環境對於小鼠 而言是熟悉的環境(familiar),因此由於對不熟悉環境的探索天性,小鼠在 test階段理論上將對非光照的不熟悉環境表現出更強的偏好性。) 

4、注意事項

(I) .為避免激光損傷,藍色激光刺激模式為間歇給光。

(II) .每次實驗前,小鼠先放入彳丁為學室適應半小時以上。

(III) .每隻小鼠實驗結束後,應用75%酒精徹底清潔實驗箱,避免小鼠行為結果 受到上一隻小鼠的氣味影響。


 

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