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五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠負性情緒及 行為的影響
點擊次數:680 發布時間:2019-11-02

摘要:探討五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠負性情緒及行為的影響。將實驗大鼠隨機分為3組,分別為大平台對照 組,小平台剝奪組和五味子木脂素組。各組動物經水平台睡眠剝奪裝置剝奪睡眠3d後進行高架十字迷宮實驗、強迫 遊泳實驗及負重遊泳實驗,記錄各項指標。研究結果顯示,與大平台對照組相比,小平台剝奪組大鼠的進入開臂時間 及次數的比例減少,強迫遊泳不動時間延長和大鼠遊泳至力竭時間減少。與小平台剝奪組相比,五味子木脂素組大鼠 進入開臂時間和次數比例延長,大鼠強迫遊泳不動時間減少和遊泳至力竭時間延長。五味子木脂素對睡眠剝奪所致 的焦慮、抑鬱及疲勞等具有明顯的保護作用。

關鍵詞:五味子木脂素;睡眠剝奪;抗焦慮;抗抑鬱;抗疲勞

 

五味子為木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis (Turcz) Baill的幹燥成熟果實,民間多以煎煮口服、泡 酒飲用、磨粉溫水口服為用,具有安神定誌的功效。社 會經濟飛速發展的今天,由於生活及工作的需求和壓 力,越來越多的人處於潛在的睡眠剝奪狀態之中,長 時間的睡眠剝奪會造成曰間活動功能下降[1-3]。研究顯 示,近一半的失眠患者都會伴有一種或幾種精神障礙, 其中焦慮障礙占大約24 %,抑鬱障礙占大約23 %[4], 包括由於失眠所導致的疲勞、體力下降等,這些都會 對患者的身心健康及生活質量造成不可預估的巨大 影響。因此,開發研究治療失眠的藥物或保健食品,除 關注夜間睡眠質量以外,還應關注對焦慮、抑鬱等負 性情緒和抗疲勞能力等曰間功能的改善作用。以往實 驗研究表明,五味子木脂素可以減少其自主活動次 數,延長戊巴bi妥鈉所致動物的睡眠時間,延長自由 活動動物等總睡眠時間,表現為鎮靜催眠作用[5-\同 時,亦有研究發現,五味子木脂素對束縛應激引起的 焦慮症及壓力引起的抑鬱症、衰老動物的疲勞能力下 降,均具有良好的抑製作用[8-9]。但五味子木脂素對於 睡眠剝奪動物所致的負性情緒,易於疲勞等方麵影響 的研究甚少。本實驗采用小平台睡眠剝奪裝置對大鼠 進行睡眠剝奪,觀察五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠的 焦慮和抑鬱等負性情緒,以及疲勞程度的影響,為把 五味子開發成具有抵製睡眠剝奪所致的曰間功能下 降的藥物及保健食品提供了藥理學基礎。

1材料 1.1實驗動物

SD大鼠,雄性,體重220g~260g,無特定病原 (specific pathogen free, SPF)級,由黑龍江中醫藥大學 藥物評價中心實驗室提供,動物許可證號:SCXK (黑) 2018-004。

1.2試劑及藥物

羧甲基纖維素鈉:天津市科密歐化學試劑開發中 心,生產批號:20180312;AB-8大孔樹脂:安徽三星樹 脂科技有限公司,生產批號:20170504;五味子木脂素 凍幹粉(總木脂素含量不小於56 % :黑龍江中醫藥大 學藥學院中藥藥理教研室;五味子藥材:遼寧,批號: 2016111。

1.2.1五味子木脂素凍幹粉製備及配置方法

藥材浸泡12 h後經8倍量95 %乙醇回流2 h,重 複3次。提取液濃縮後經AB-8大孔樹脂柱吸附,乙醇 液梯度洗脫,收集80 %乙醇洗脫液。濃縮成浸膏,製成 凍幹粉,經紫外分光光度計在254 nm波長下測定凍幹 粉中總木脂素含量不小於56 %。臨用前將五味子木脂 素凍幹粉與1 %羧甲基纖維素鈉溶液配製成濃度為 13.44 mg/mL的五味子木脂素混懸液。

1.3儀器

負重遊泳裝置(直徑50 cm,高60 cm 圓捕、強迫遊泳裝置(直徑30 cm,高60 cm圓桶):市 售;高架十字迷宮:上海芭乐app最新版下载黄信息科技有限公司;

2方法

2.1實驗分組

將實驗動物於實驗室適應環境[溫度(24±2 °C,濕 度<55±15 %,12h明暗交替(光照:7:00~19:00,黑暗: 19:00〜7:00 ],動物自由獲取食物和水,周後隨機分 為3組,每組8隻,分別為大平台對照組,小平台剝奪 組和五味子木脂素組。

2.2睡眠剝奪及給藥

大平台對照組實驗動物置於大平台對照裝置中, 小平台剝奪組和五味子木脂素組實驗動物分別置於 小平台睡眠剝奪裝置中,連續3 d,自由飲食和飲水。睡 眠剝奪期間,大平台對照組和小平台剝奪組實驗動物 分別經灌胃途徑每曰早晚8點給予1 %羧甲基纖維素 鈉溶液(1.0mL/200g體重,五味子木脂素組實驗動物 經灌胃途徑每曰早晚8點給予五味子木脂素混懸液 (13.44 mg/mL, 1.0 mL/200 g 體重,連續給藥 3 d

2.3 高架十字迷宮實驗

第4天早8點,將各組實驗動物分別從小平台剝 奪裝置和大平台對照裝置中取出,用吹風機將其毛吹 幹,再放於弱光、四周有黑色簾子的高架十字迷宮上。 大鼠背對實驗者,頭朝向開臂端放置,采集5 min視 頻。每隻大鼠做完實驗後,高架十字迷宮開臂和閉臂 都必須先用低濃度酒精擦完,再用高濃度酒精擦,等 酒精揮發後,按照上述步驟,再繼續放第2隻大鼠,直 至所有動物都做完實驗。觀看視頻,記錄動物進入開 臂次數和滯留時間,閉臂次數及滯留時間,計算開臂 次數比例和滯留時間比例。

開臂次數比例=開臂次數/(開臂次數+閉臂次魏

開臂時間比例=開臂滯留時間/(開臂滯留時間+閉 臂滯留時間)

2.4強迫遊泳實驗

睡眠剝奪前,先將各組大鼠置於水深45 cm,直徑 30 cm的圓桶中,水溫維持在(28±2 °C,進行15 min的 強迫遊泳訓練,然後將各組動物分別置於大平台對照 裝置和小平台睡眠剝奪裝置中,連續3 d後,從平台裝 置中取出各組實驗動物,再次將大鼠置於圓桶中遊泳 5 min,記錄5 min內累加靜止不動時間即大鼠除了為 避免沒入水中而向上的運動外而無其它行為的時 間)。

2.5負重遊泳實驗

第4天早8點,各組實驗動物分別從小平台剝奪 裝置和大平台對照裝置中取出,用吹風機將其毛吹 幹。然後在大鼠尾部負重,重量為大鼠體重5%的鉛 塊。負重後的大鼠,立即放入水深45 cm,直徑50 cm 的圓桶中,水溫維持在(28±2 °C,進行負重強迫遊泳實 驗。記錄大鼠力竭時間即從大鼠放入圓桶中開始計 時,直至大鼠沉入桶底超過10 s沒有再次遊上水麵呼 吸的持續時間

2.6統計學處理

采用SPSS17.0統計軟件處理實驗數據,結果采用 x±S.E.M.表示,單因素方差分析方法進行數據處理, LSD法進行兩兩比較,<0.05有統計學意義。

3結果

3.1五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠焦慮樣行為的影響 五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠進入開臂次數及 時間比例的影響結果見圖1。

 

與大平台對照組相比,小平台剝奪組大鼠的進入 開臂時間比例和開臂次數比例明顯減少,具有顯著性 差異^<0.05)。與小平台剝奪組相比,五味子木脂素組 大鼠的進入開臂時間比例和開臂次數比例明顯增加, 具有極顯著性差異(p<0.01)

3.2五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠抑鬱樣行為的 影響

五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠不動時間的影響 

與大平台對照組相比,小平台剝奪組大鼠的強迫 遊泳不動時間明顯延長,有極顯著性差異^<0.01)。與 小平台剝奪組相比,五味子木脂素組大鼠的強迫遊泳 不動時間明顯減少,有極顯著性差異^<0.01)

3.3五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠疲勞程度的影響 五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠力竭時間的影響

與大平台對照組相比,小平台剝奪組大鼠的遊泳 至力竭時間明顯減少,有極顯著性差異^<0.01。與小 平台剝奪組相比,五味子木脂素組大鼠的遊泳至力竭 時間明顯延長,有極顯著性差異^<0.01

4結論與討論

本實驗結果顯示,五味子木脂素能增加睡眠剝奪 大鼠進入開臂時間和次數的比例,減少大鼠強迫遊泳 不動時間,延長大鼠遊泳至力竭時間,具有明顯對抗 睡眠剝奪所致的焦慮,抑鬱和疲勞的作用。高架十字 迷宮利用大鼠對新異環境的探究特性和對高懸敞開 臂的恐懼心理,形成的矛盾衝突從而考察動物焦慮狀 態,動物進入開放臂次數比例和進入開放臂停留時間 比例與焦慮程度直接相關[10],是抗焦慮研究中應用 廣泛的模型之一。睡眠剝奪後的大鼠進入開臂時間及 次數比例明顯減少、表現出明顯的焦慮樣狀態。強迫 遊泳實驗可以很好的模擬人類抑鬱情緒,被廣泛用於 抗抑鬱藥的篩選和評價[11]。其不動的時間可作為評價 抑鬱行為的指標,動物不動時間增加即出現抑鬱傾 向。若藥物可減少動物的不動時間,即提示該藥物可 能具有抗抑鬱活性1]。睡眠剝奪後的大鼠強迫遊泳不 動時間明顯延長,表現出明顯的抑鬱樣狀態。疲勞主 要表現為體力和運動耐力下降,負重遊泳實驗裝置簡 單,實驗結果能直接ke觀地反映動物的體能,是為 常用的運動耐力測定方法睡眠剝奪後的大鼠遊泳 至力竭時間明顯減少,表現為易於疲勞。結合3個行 為指標綜合探討了五味子木脂素對睡眠剝奪大鼠曰 間行為的影響,為五味子改善睡眠剝奪大鼠的曰間功 能提供了藥理學基礎。

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